A escolha da microplaca para cultura de células aderentes depende da quantidade de células que se deseja estudar; necessidade de extração de RNA/DNA/proteína; necessidade de ensaio por microscopia ou ensaio de drogas e toxicidade. 

 

?Finalidade: 

 

Extração de RNA/DNA/proteína → exige mais biomassa → usar 6 ou 12 poços
 

Microscopia de alta resolução → usar placas de 24 ou 96 poços
 

Ensaios em larga escala (screenings) → usar placas de 96; 

 

?Dicas práticas:

• Prefira poços maiores se:
   

  • Você precisa de mais células por condição
     

  • Precisa coletar material para Western blot, RNA, etc.
     

• Prefira poços menores se:
   

  • Está testando muitas condições (ex: doses, drogas)
     

  • Quer economizar reagentes caros

???? Quantas células semear por poço?
 

Valores médios aproximados de crescimento de células aderentes em poços, considerando que as células irão crescer até cerca de 80-90% de confluência após 24–72 horas:

???? Placa de 96 poços
? Volume por poço: 100–200 µL
? Células aderentes: 1 × 10? a 3 × 10?

???? Placa de 48 poços
? Volume por poço: 300–500 µL
? Células aderentes: 5 × 10? a 1 × 10?

???? Placa de 24 poços
? Volume por poço: 500–1000 µL
? Células aderentes: 1 × 10? a 2 × 10?

???? Placa de 12 poços
? Volume por poço: 1–2 mL
? Células aderentes: 2 × 10? a 5 × 10?

???? Placa de 6 poços
? Volume por poço: 2–5 mL
? Células aderentes: 5 × 10? a 1 × 10?

Esses números se referem à densidade ao final do crescimento (após 24–72 h), não necessariamente à densidade inicial semeada, que costuma ser 20–50% disso, dependendo do tempo de cultivo e da taxa de proliferação da linhagem usada.

?Formato do poço:

 

O fundo dos poços pode ser plano (fundo F), cônico (fundo V), arredondado/esférico (fundo U) ou plano com borda arredondada (fundo C):

• Poços de fundo plano (fundo F) permitem a máxima transmissão de luz e são adequados para aplicações de leitura de fundo, incluindo medições de intensidade de fluorescência total em leitores de placas ou imagens de alto conteúdo em microscópios automatizados e sistemas de triagem. Além disso, poços de fundo plano são ideais para culturas de células aderentes cultivadas em monocamadas.

 

• Poços com fundo cônico (fundo em V) permitem a recuperação máxima de pequenos volumes de amostra ou a concentração de pequenas partículas. Este formato de poço foi originalmente projetado para ensaios de hemaglutinação, onde um pequeno pellet de hemácias poderia ser concentrado na ponta do cone em forma de V.

 

• Poços com fundo arredondado/esférico (fundo em U) destinam-se a facilitar a mistura, a lavagem e o revestimento, bem como a recuperação de soluções dos poços. Poços arredondados também podem reduzir o ar aprisionado no fundo do poço, permitindo um nível de menisco mais consistente de poço para poço. Este formato de poço é frequentemente utilizado com células em suspensão e culturas esferóides ou organóides.

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